（更正一下：之前的流速设置有问题，现改为30毫升每分钟，而不是1毫升每分钟，实验室采用的是高压液相色谱。）

几分钟后，流动相运行平稳，进出硅胶柱的细管中充满了液体，不再存在气泡。

目前样品柱中的样品岿然不动，并没有在溶剂的裹挟下向下移动，这是因为当前的溶剂为纯石油醚，极性非常小。

许秋打开紫外检测器，设置5分钟后A：B的体积比为90:10，也就是缓慢增大流动相的极性。

流动相的极性不能贸然的迅速提升，因为仪器只能控制当下抽取溶剂的比例。

换言之，仪器对流动相溶剂比例的控制是滞后的，硅胶柱中实际流动相的溶剂比例可能是十几秒、几十秒前的比例。

而液相色谱分离、提纯的原理，主要是利用不同分子结构的物质，在色谱柱中移动所需的溶剂极性的临界值不同。

也就是说，一旦流动相的极性过高，同时达到多种组分的临界值，导致这些组分没有被彻底分开，同时随着流动相向下移动，再同时被收集，就意味着实验失败。

那么就要重新拌样、旋蒸、填柱子、过柱子了。

这台液相色谱仪同时只能处理一根柱子，所以许秋在操作的时候，韩嘉莹去把另外两个样品填入小样品柱，完成装样。

之后她没事可做，便搬了个圆凳坐在他旁边围观。

随着时间的推移，A、B溶剂中B的体积分数缓慢提升。

“师兄，还没反应啊，二氯甲烷都20%多了，还一动不动的。”

“这说明极性还是不到位，慢慢升吧。”

“感觉过柱子好费溶液呀。”看着旁边溶剂桶的液面已经微微下降，韩嘉莹吐槽了一句。

“是啊，而且是带有反应产物的混合溶剂，想重复利用也比较麻烦，最多用来洗一洗瓶子，”许秋笑了笑，“不过二氯甲烷和石油醚，每种都订了四桶，乙酸乙酯订了两桶，肯定是够用了一段时间了。”

又过了一会儿，当软件上实时显示着当前B%为32%时，空白硅胶柱中终于出现了一抹红色。

“动了，它动了。”

“嗯，准备干活。”许秋将B%维持在30%。

硅胶柱中，那一抹红色慢慢的变为一团红色，接着又变为一条红色。

当红色的头部到达空白色谱柱的下端后，许秋将收集模式从废液模式改为工作模式。

淡红色的溶液随着一根针头喷射入试管架上的1号试管中。

十几秒后，1号试管装满，针头自动移动至2号试管的位置，继续喷射……

许秋也没闲着，他用毛细管蘸取了少量1号试管中的溶液，然后用石油醚：二氯甲烷1:1配比进行点板。

他对比了此次点板的结果和上午的结果。“只有一个样品点，而且还很浅，从位置来看，是那个主要产物的。”

韩嘉莹则指了指上方的针头。“这边溶液喷的好快，感觉没过多长时间，一跟试管就装满了。”

“我们用的是高压液相色谱，流速是30毫升每分钟，换算一下，一个试管的容积大约10毫升，差不多一分钟四管左右吧，而普通的液相色谱通常仅为1毫升每分钟，效率差了几十倍。”许秋笑了笑道：

“现在的压力只有30多个大气压，这台仪器的最大承载压力可达100大气压，对应的极限流速大概在60毫升每分钟。”

“差距这么夸张呀，”韩嘉莹疑惑道：“那这样的话，不会降低分离效果吗？”

“因为我们只有两个样品点，而且它们的分离程度比较高，所以并不用担心这个问题。”许秋解释道：“之后如果涉及比较难以分离的样品，可以适当的降低流速，提高分离效果。”

……

随着溶液继续喷射，后面试管中液体的颜色也越来越红。

第一次实操，许秋比较谨慎，每隔五个试管点一次板，判断试管中的组分是否纯净。

幸运的是，均只有一个样品点，而且在硅胶板上的爬升位置也都一致，表明是同一种产物。

二十多分钟后。

“师兄，我们的试管快用完了。”韩嘉莹指了指试管架，现在已经运行到第97号试管了。

“等下先把另外一组干净的试管换上吧。”许秋也是头疼，此时硅胶柱中的那一条红色还没有完全消失的迹象，再来100根试管都不一定够用。

待第100号试管被装满，许秋将仪器暂停，然后把试管架连同上面的试管转移到旁边的通风橱中，用铝箔纸盖上，接着又取来另外装有100根新试管的试管架，继续收集。

“要不要我再去样品仓库领用一些试管。”韩嘉莹主动提议，之前他们只领用了300只试管，本以为够用了，结果现在看来过一次柱子都不一定够用，虽说可以洗净重复利用，但势必会大幅拖慢实验速度。

“确实是个问题，让我想想……”许秋目光游动，液相色谱仪、试管架、韩嘉莹、溶剂桶、废液桶，他突然眼前一亮，“有了，我们可以利用废液管，直接收集溶液，用一次性PE杯代替试管。”

“这个方法好呀，”韩嘉莹连连点头，“一个PE杯的容量相当于二十只普通试管了，而且用完还不需要清洗。”

“优点确实显而易见，不过风险也大，万一混入了一点点其他组分，那么整杯溶液都要重新分离。”许秋笑了笑道：

“当然我们也不能因噎废食，还是先把这个方法应用起来。”

“好，我去找PE杯。”

许秋则再次暂停仪器，将废液管从废液桶中取出来，并在通风橱中用二氯甲烷溶剂将其冲洗干净，然后用铁架台、长尾夹简单搭建了一个溶液收集装置，把学妹取来的PE杯放在装置的正下方。

继续收集，切换为废液模式。

又过了三十多分钟，一共收集了七杯溶液，每一杯溶液许秋都点板检测了，成分都是单一产物。

此时，空白硅胶柱中的那一条红色基本消失，喷射出的溶液基本恢复无色透明。

许秋将废液管重新插回废液桶，朝学妹问道：“你说我们还要不要收集第二种产物了？”

“唔……”韩嘉莹想了想道：“还是收集吧，这是我们第一次过柱子，完美一点也能多增加些经验，万一主要产物还在柱子里呢。”

许秋被逗笑了，“这100根试管，七个杯子也能是副产物？”

“嘿嘿，以防万一嘛。”

“行，听你的。”许秋也没坚持，反正一个多小时都做了，也不在乎再加个钟。